活细胞糖酵解功能实时分析——安捷伦Seahorse XF糖酵解压力测试试剂盒

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安捷伦Seahorse XF糖酵解压力测试可以直接测量细胞外酸化速率 (ECAR)来评估活细胞糖酵解相对功能,是测量细胞糖酵解功能的标准方法。该测试通过推动细胞糖酵解来测定糖酵解通路容量,并评估研究模型以提高糖酵解活性来满足代谢和生物能量需求的能力。

实验背景:

糖酵解和氧化磷酸化是细胞内两条主要的能量生产途径。大多数细胞具有在这两条途径之间转换的能力,从而适应环境的改变。糖酵解与大量正常生理过程(干细胞多能性、获得性免疫响应、肌肉功能、脑功能)以及一些病理生理过程(肿瘤形成)相关。糖酵解包括一系列生化反应,可将葡萄糖转化成乳酸,同时产生ATP和净余的质子。随着糖酵解的发生,培养的细胞会释放质子并酸化培养基。Seahorse XF细胞能量代谢分析系统实时检测细胞周围培养基中的质子浓度变化(胞外酸化率或ECAR)来衡量细胞糖酵解活性。

实验原理:

首先,细胞在无葡萄糖和丙酮酸钠的糖酵解压力测试检测液中孵育,并测量 ECAR获得非糖酵解酸化速率。

葡萄糖(Glucose):第一次注射的是饱和浓度的葡萄糖。细胞利用加入的葡萄糖并通过糖酵解通路将其分解成丙酮酸,产生ATPNADH、水和质子。质子排出到周围溶液中引起 ECAR快速增加。这种葡萄糖诱导的反应被称为基础条件下的糖酵解速率。

寡霉素(Oligomycin):第二次注射的药物为oligomycinATP合酶的抑制剂,可抑制线粒体ATP产生,从而将能量产生转移至糖酵解通路,引起ECAR进一步升高,反映了细胞最大的糖酵解能力。

2-脱氧葡萄糖(2-deoxy-glucose, 2-DG)2-DG是最后注射的药物,该药通过竞争性结合糖酵解途径的己糖激酶而抑制糖酵解,引起ECAR降低从而证实实验中 ECAR的产生来源于糖酵解途径。

实验优势:

Seahorse XF糖酵解压力测试通过增加糖酵解活性来检验细胞对挑战性条件做出反应的能力。与终点测定法(例如葡萄糖摄取或乳酸外排)相比,该测定法可在多种条件下提供每个检测样本糖酵解功能的读数,从而获得更丰富的数据。Seahorse XF糖酵解压力测试是一种标准和全面的评估糖酵解通路关键参数的方法:糖酵解、糖酵解能力、糖酵解储备和非糖酵解的酸化。

词汇表:

文献应用:

1Cancer associated fibroblast FAK regulates malignant cell metabolism

FAK depletion in FSP-1 positive CAFs alters malignant cell metabolism

2Adenylate kinase hCINAP determines self-renewal of colorectal cancer stem cells by facilitating LDHA phosphorylation

Adenylate kinase hCINAP promotes the Warburg effect in CRC cell

3Stress-Induced Metabolic Disorder in Peripheral CD4+ T Cells Leads to Anxiety-like Behavior

Stress Causes Metabolic Disorder and Mitochondrial Fission in CD4+ T Cells  

4eIF4A supports an oncogenic translation program in pancreatic ductal adenocarcinoma

CR-31 translationally targets oxidative phosphorylation and glycolysis in PDA

声明:仅供研究使用,不用于诊断性操作。

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2020年9月30日 10:11
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